1.3 Иммунологические методы диагностики

Разнообразие форм иммунного ответа предопределяет широкий набор методов их регистрации. Однако каждой форме иммунологического реагирования соответствует только свой, определенный набор методов исследования, что важно знать для правильного подбора методов тестирования иммунного состояния организма.

Условно все методы можно разделить на две большие группы: прямые методы выявления патогена, когда лаборатория стремится выделить фрагмент возбудителя (наследственный материал или антигены) или с помощью культурального посева обнаружить патогены на искусственных питательных средах, и непрямые. К прямым методам диагностики следует отнести бактериологический анализ, микроскопию и иммунофлуоресценцию и различные методы ДНК-диагностики (в первую очередь — амплификационные и гибридизационные технологии). К непрямым методам относятся гистология, инструментальный анализ и, конечно, серологический анализ, то есть анализ гуморального ответа организма на присутствие патогена.

Оценка гемограммы (относительное и абсолютное количество лимфоцитов, лейкоцитов и эритроцитов). Оценку иммунного статуса следует начать с изучения параметров периферической крови: подсчета общего количества лейкоцитов и эритроцитов в 1 мл крови и подсчета мононуклеарных клеток в мазке. Эти данные позволят оценить относительное (%) и абсолютное количество лимфоцитов в 1 мл крови.

Оценка гуморального звена иммунной системы. Исследование гуморального звена иммунной системы (антительный ответ, В-клеточный ответ иммунной системы) включает в себя оценку В-лимфоцитов (общее содержание в крови, анализ антигенных детерминант) и вырабатываемых ими антител (разных классов иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA, IgE), а также определение количества антителообразующих клеток (АОК) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

При регистрации антителообразования учитывается наличие циркулирующих в крови и лимфе антител, секреторных, или местных, образующихся локально слизистыми покровами, и антител, содержащихся в клетках-продуцентах. Возможно также оценить способность В-клеток синтезировать антитела в культуре in vitro.

Определение антител, иммуноглобулинов разных классов. Определение иммуноглобулинов — один из наиболее распространенных методов исследования гуморального иммунитета. Для количественной оценки иммуноглобулинов сыворотки крови чаще всего используют методы: 1) радиальной иммунодиффузии; 2) иммуноэлектрофореза; 3) метод иммунофлуоресценции.

Практически все методы исследования гуморального иммунитета основаны на учете строго специфической реакции антиген-антитело, причем при постановке теста один из участников этой реакции известен, а наличие другого предполагается. В результате реакции между антигеном и антителом образуются иммунные комплексы антиген-антитело, которые так или иначе обеспечивают обезвреживание и нейтрализацию чужеродного антигена. Если образовавшиеся молекулярные агрегаты антиген-антитело имеют достаточно большие размеры, они выпадают в осадок — происходит их преципитация. В том случае, когда антиген представлен чужеродной клеткой (эритроцит, бактерия), в результате образования на ее поверхности комплекса антиген-антитело изменяются физико-химические свойства клеточной мембраны и, при условии крупных размеров антитела (IgM), происходит «склеивание» (агглютинация) клеток. Если же антитело имеет относительно малые размеры (например IgG), то образовавшийся на поверхности клетки иммунный комплекс не способен вызвать их агглютинацию. В этом случае речь идет о так называемых неполных антителах, которые блокируют чужеродные антигены так, что они не могут взаимодействовать с полными антителами. Агглютинацию таких клеток можно вызвать, добавив к ним так называемые гетерологические антитела, т.е. антитела против иммуноглобулинов человека (например, реакция Кумбса — см. ниже). Для идентификации иммунных комплексов часто используют их свойства образовывать преципитаты (выпадать в осадок) или агглютинировать различные клетки или частицы (например, эритроциты, частицы латекса и т.д.).

Наибольшей точностью обладают методы, основанные на обнаружении и клинической оценке меток (маркеров), располагающихся на участвующих в иммунной реакции антителах (радиоактивные вещества, изотопы, ферменты, флюорохром): радиоиммунный, иммуноферментный и метод иммунофлуоресценции.

Сывороточные антитела представлены преимущественно IgG и IgM, которые взаимодействуют в основном с растворимыми и корпускулярными антигенами соответственно. Следовательно, антитела, ассоциированные с IgG, можно обнаружить при помощи реакций, основанных па феномене преципитации, а связанные с IgM — при помощи реакций, основанных на феномене агглютинации. Антитела, участвующие в формировании феномена преципитации (преципитины), выявляют в реакциях кольцевой преципитации (пробирочная) и преципитации в гелях (пластинчатая). В обоих вариантах ингредиенты реакции должны быть прозрачными, чтобы визуально зарегистрировать образовавшийся преципитат в виде кольца на границе двух сред при постановке пробирочной РП (реакция преципитации) или в виде линий между лунками с реагентами при постановке реакции диффузионной преципитации (РДП).

Антитела, участвующие в формировании феномена агглютинации (агглютинины), выявляют в реакциях агглютинации — пробирочной, пластинчатой, кольцевой в различных вариантах. Агглютинат обычно хорошо виден глазом в форме беловато-сероватых трудно разбиваемых при встряхивании комочков. Для выявления агглютининов в молоке реакцию ставят с подкрашенным антигеном.

Для повышения чувствительности серологических (лат. serum — сыворотка) реакций обычно растворимые антигены закрепляют на какой-либо крупной частице, получая искусственный корпускулярный антиген (например, в реакциях латекс-агглютинации или непрямой гемагглютинации), или вводят вторую, индикаторную систему (например, в реакции связывания комплемента).

Во всех этих реакциях уровень антител определяют в титрах, принимая за последний наибольшее разведение сыворотки, обеспечивающее положительный результат реакции.

Иммунная гиперактивность. Совершенно очевидно, что нормально функционирующая иммунная система жизненно необходима, однако иногда она может нанести ощутимый вред организму. Чрезмерная ответная реакция на какие-либо факторы внешней среды или длительное воздействие аллергенов нередко приводят к повреждению тканей и развитию реакций гиперчувствительности.

Наглядный пример — аллергия и некоторые аутоиммунные заболевания.