Начало пцр

Все реакционные пробирки помещают в термоциклер (ПЦР машина), запускают автоматический процесс репликации ДНК (смотри анимацию). Машина используемая в этой лаборатории считывает и описывает происходящие события. (слева направо: температура, оставшееся время, номер цикла, растворение, отжиг, удлинение).

Температурный контроль настраивается последовательно: В первый шаг инкубации 95С – 10 минут.

30 последовательных шагов:

Расплавление – 95^оС – 30 секунд

Отжиг – 60^оС - 30 секунд

Достраивание – 72^оС – 45 секунд.

Последний шаг достраивания 72^оС 10 минут.

Последний шаг – 4^оС сохраняя эту температуру.

При каждом цикле, первый шаг (расплавление) разделение двойной цепочки ДНК, двойная ДНК спираль нагревается в пробирке с ПЦР реагентной смесью до 95^оС 30 секунд. Праймеры не могут прикреплятся к цепочке ДНК при такой высокой темперетуре поэтому пробирка охлаждается до 60^оС. При этой температуре праймеры прикрепляются (отжигают) один связанный кусок ДНК. (две обособленые части ДНК не могут восстановиться потому, что праймеров в растворе много больше, поэтому, более вероятно, что ДНК цепь присоеденится к праймеру вместо чего-либо другого). Последний шаг – (удлинение) позволяющий ДНК полимеразе достроить копию цепочки ДНК проходит при температуре 70^оС – 45 секунд.

Три шага – разделение цепочки, отжиг образцов праймеров и синтез новой цепочки – происходит менее чем за две минуты. Что происходит в каждой пробирке. В конце цикла каждый кусочек ДНК в пробиркаю будет отдуплецирован. Цикл можно повторить 30 и более раз и каждый новый синтезированный ДНК даст начало очередной цепи. После 30 циклов 1 миллион копий изначальной цепочки ДНК может быть сделан.